Resumo: O objetivo deste trabalho foi desenvolver marcadores "sequence-characterized amplified region" (Scar) para identificar os biótipos B, Q e nativo brasileiro da mosca-branca [Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae)]. Produtos de amplificação de DNA polimórfico amplificado ao acaso (RAPD), exclusivos aos biótipos B e nativo brasileiro, foram selecionados após análise de 12.000 amostras, para desenhar um conjunto de iniciadores específicos de Scar. Os marcadores Scar BT-B1 e BT-B3, usados para detectar o biótipo B, produziram fragmentos de PCR de 850 e 582 pb, respectivamente. O marcador Scar BT-BR1, utilizado para identificar o biótipo brasileiro, produziu um fragmento de PCR de 700 pb. Os marcadores Scar foram testados contra o biótipo Q, e um fluxograma foi proposto para indicar os passos para tomada de decisão sobre quando usar esses iniciadores, para discriminar corretamente os biótipos. Este procedimento permitiu identificar os biótipos que ocorrem em amostras de campo, como o biótipo B. O conjunto de iniciadores utilizados permitiu discriminar os biótipos B, Q e nativo brasileiro de B. tabaci. Esses iniciadores podem ser utilizados com sucesso para identificar o biótipo B de B. tabaci em amostras de campo, e mostram apenas um biótipo específico presente em todas as culturas.

Abstract: The objective of this work was to develop sequence-characterized amplified region (Scar) markers to identify the B, Q, and native Brazilian biotypes of the sweet potato whitefly [Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae)]. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) amplification products, exclusive to the B and Brazilian biotypes, were selected after the analysis of 12,000 samples, in order to design a specific Scar primer set. The BT-B1 and BT-B3 Scar markers, used to detect the B biotype, produced PCR fragments of 850 and 582 bp, respectively. The BT-BR1 Scar marker, used to identify the Brazilian biotype, produced a PCR fragment of 700 bp. The Scar markers were tested against the Q biotype, and a flowchart was proposed to indicate the decision steps to use these primers, in order to correctly discriminate the biotypes. This procedure allowed to identify the biotypes that occur in field samples, such as the B biotype. The used set of primers allowed to discriminate the B, Q, and native Brazilian biotypes of B. tabaci. These primers can be successfully used to identify the B biotype of B. tabaci from field samples, showing only one specific biotype present in all cultures.

Aedes aegypti (L.) é vetor de importantes doenças como a febre amarela e a dengue, presentes em regiões tropicais e subtropicais. Para o sucesso no seu controle biológico é importante conhecer a estrutura genética e os mecanismos que resultaram na diversidade das populações. O objetivo deste estudo foi analisar a variabilidade genética de diferentes populações de A. aegypti utilizando marcadores de RAPD (Polimorfismo de DNA amplificado ao acaso). DNA de dez larvas coletadas a partir de três populações de diferentes localidades foi analisado usando dez iniciadores de RAPD. Os resultados indicaram a existência de variabilidade genética inter e intrapopulacional. Isso foi confirmado por um dendrograma que agrupou as populações em dois blocos principais com similaridade genética de 24%. Em um desses agrupamentos foi possível distinguir duas populações que apresentaram grau de similaridade de 50%. A diversidade genética entre as populações (55,01%) foi mais elevada que a diversidade genética dentro das populações (44,99%) aplicando-se análise por AMOVA. Altos níveis de polimorfismo genético (Ht = 0.2656) e de diferenciação genética entre as populações (Gst = 0.3689) foram observados. Além disso, o protocolo de extração de DNA adotado mostrou-se eficiente para a análise do inseto independente do seu estágio de desenvolvimento, evitando-se o acréscimo de reagentes ou etapas adicionais de processamento. Futuros experimentos poderão ser realizados para confirmar se a variabilidade observada pode estar ligada às características de resistência de cada população a um determinado pesticida.

Aedes aegypti (L.) is an important vector of diseases such as the yellow fever and dengue, present in tropical and subtropical regions. The objective of this study was to analyze the genetic variability of different A. aegypti populations using RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) markers as a basic study to support the use of biocontrol strategies. DNA of ten collected larvae from three different populations were analyzed using ten RAPD primers. The results indicated the existence of genetic variability inter and intrapopulation. This was confirmed by a dendrogram that grouped the populations in two main clusters with a genetic similarity of 24%. In one of these clusters, it was possible to distinguish two populations that showed 50% similarity. The molecular variance analysis indicated that the interpopulation genetic diversity (55,01%) was higher than the intrapopulation genetic diversity (44,99%). A high genetic polymorphism (Ht = 0.2656) and high levels of genetic differentiation between populations (Gst = 0.3689) were found. The adopted DNA extraction protocol proved to be efficient regardless the insect development stage used, avoiding the addition of reagents or additional stages of processing. Future experiments can be performed to confirm if the detected variability is related to the resistance characteristics of each population to a determined pesticide.

Neste trabalho foram realizados testes de patogenicidade com 210 estirpes de Bacillus thuringiensis contra larvas de Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus, a fim de se determinar as mais eficazes. Estas estirpes foram isoladas de diversas regiões do Brasil e estão armazenadas na coleção de Bacillus spp. da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. As estirpes selecionadas foram caracterizadas por métodos morfológicos (microscopia), bioquímicos (SDS-PAGE 10%) e moleculares (Reação em Cadeia da Polimerase). Foram selecionadas seis estirpes entomopatogênicas de Bacillus thuringiensis. Nenhuma das estirpes de Bacillus thuringiensis apresentou produtos de PCR esperados para a detecção dos genes cry4, cry11 e cyt1A. A patogenicidade das estirpes não está associada à presença das toxinas Cry4, Cry11 ou Cyt, assim, essas estirpes poderão ser utilizadas para a formatação de um bioinseticida alternativo contra mosquitos.

The objective of this work was to evaluate 210 Bacillus thuringiensis strains against Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus larvae to select the most effective. These strains were isolated from different regions of Brazil and are stored in a Bacillus spp. collection at Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, Brasília, Brazil. The selected strains were characterized by morphological (microscopy), biochemical (SDS-PAGE 10%) and molecular (PCR) methods. Six B. thuringiensis strains were identified as mosquito-toxic after the selective bioassays. None of the strains produced the expected PCR products for detection of cry4, cry11 and cyt1A genes. These results indicate that the activity of mosquitocidal Brazilian strains are not related with Cry4, Cry11 or Cyt proteins, so they could be used as an alternative bioinsecticide against mosquitoes.